TIANcombi DNK Lyse va Det PCR to'plami

PCR aniqlash uchun DNKni turli materiallardan tez tozalash.

TIANcombi DNK Lyse & Det PCR to'plami DNKni tez tayyorlash va PCRni kuchaytirish uchun barcha reaktivlarni o'z ichiga olgan noyob qadoqlash dizaynini qabul qiladi. U turli namunalardan (o'simlik to'qimalari, urug'lar, hayvonlar to'qimalari, qon, xamirturush va bakteriyalar) bir bosqichli genom DNKni tozalash va keyinchalik PCRni kuchaytirish va aniqlashda qo'llaniladi. Protein, RNK va boshqa ikkilamchi metabolitlarni olib tashlash, organik erituvchilarni ekstraktsiya qilish, shuningdek, etanolni cho'ktirish bosqichlari tozalash jarayonini talab qilmaydi, bu operatsiyani sodda va tez bajaradi. Mahsulot sifati barqaror va ishonchli.

Ushbu to'plamda taqdim etilgan 2 × Det PCR MasterMix - bu juda mos keladigan PCR reaktivi, u oqsillar kabi iflosliklarni olib tashlamasdan DNKni samarali va maxsus kuchaytira oladi. Bu reaktiv tarkibida Taq DNK polimeraza, dNTPs, MgCl mavjud₂, tampon, shuningdek, PCR reaktsiyasi uchun kuchaytirgich, optimizator va stabilizator. Reaktivni qo'llash PCR reaktsiyasini tez, sodda, sezgir, o'ziga xos va barqaror qiladi. Shuning uchun, bu to'plam, ayniqsa, yuqori o'tkazuvchanlikdagi skrining uchun mos keladi.

Mushuk Yo'q	Paket hajmi
4992527	20 ml × 50 rxn
4992528	20 ml × 200 rxn

Bizga elektron pochta xabarini yuboring

Mahsulot detallari

Eksperimental misol

Tss

Mahsulot teglari

Xususiyatlari

■ Oddiy va tez: har xil to'qimalardan DNKni 5 daqiqa ichida suyuq azotni maydalashga hojat qoldirmasdan olish mumkin.
■ Keng qo'llanilishi: o'simlik barglari, urug'lari, hayvon to'qimalari, qon namunalari (yangi qon, antikoagulyatsiya, qon quyqalari, quritilgan qonli dog'lar va boshqalar), xamirturush va bakteriyalar uchun qo'llaniladi.
■ Kuchli muvofiqlik: PCR reaktivi har xil namuna manbalaridan olingan DNKni kuchaytirish uchun javob beradi.

Ilovalar

■ Genlarni aniqlash: genlarni keng miqyosda aniqlash uchun ideal tanlov.

Muhim eslatmalar

■ Paxta barglari kabi fenollar yuqori bo'lgan namunalar uchun namunaning kirish miqdori qat'iy ravishda 0,4 mg dan kam bo'lishi kerak, aks holda PCR reaktsiyasi ta'sir qiladi.

Barcha mahsulotlar ODM/OEM uchun moslashtirilishi mumkin. Tafsilotlar uchun,Iltimos, moslashtirilgan xizmatni (ODM/OEM) bosing

Oldingi: GMO ekinlarini ekstraktsiya qilish va kuchaytirish to'plami

Keyingi: Qon to'g'ridan -to'g'ri PCR to'plami

	DNK navi 5 mg makkajo'xori, bug'doy, guruch, soya va paxta barglari va urug'laridan olingan. DNK maxsus primerlar yordamida PCR yordamida kuchaytirildi. Har bir bo'lakka 20 ml elluentlardan 6 ml DNK yuklandi. 1: Ijobiy nazorat genomi; 2: namunalarni qoldiring; 3: urug 'namunalari; 4: NTC; 5: D2000 astarlari
	M: TIANGEN marker D2000; 1: Ijobiy nazorat; 2-7: filtr qog'ozida quritilgan qonli dog'lar soni mos ravishda 1-6; 8: Salbiy nazorat. 3 mm zımba filtr qog'ozidan quritilgan qonli joylarni ekstraktsiya testi uchun material sifatida olish uchun ishlatilgan. Har bir bo'lakka 20 ml elluentlardan 6 ml DNK yuklandi.
	M: TIANGEN marker D2000; 1: Ijobiy nazorat (shablon sifatida genomik DNK ishlatilgan); 2-7: Qo'shilgan qon miqdori mos ravishda 10 mkl, 20 mkl, 30 mkl, 40 mkl, 50 mkl va 60 mkl; 8-13: Qo'shilgan qon miqdori mos ravishda 10 mkl, 20 mkl, 30 mkl, 40 mkl, 50 mkl va 60 mkl; 14: NTC. Hammasi bo'lib 20 mkl eluentdan 6 ml DNK agarozli jelga yuklangan.

Savol: Kuchaytiruvchi bantlar yo'q

A-1 shablon

■ Andoza tarkibida oqsil aralashmalari yoki Taq ingibitorlari va boshqalar mavjud. - DNK shablonini tozalang, oqsil aralashmalarini olib tashlang yoki tozalash to'plamlari yordamida DNK shablonini oling.

■ Shablonning denaturatsiyasi to'liq emas - Denaturatsiya haroratini mos ravishda oshiring va denaturatsiya vaqtini uzaytiring.

■ Andoza degradatsiyasi-shablonni qayta tayyorlang.

A-2 astar

■ Astarlarning sifati past--astarni qayta sintez qiling.

■ Primer degradatsiyasi - Konserva qilish uchun yuqori konsentratsiyali primerlarni kichik hajmga bo'ling. Ko'p muzlatish va eritishdan saqlaning yoki uzoq vaqt davomida 4 ° C haroratda saqlang.

■ Astarlarning noto'g'ri dizayni (masalan, astar uzunligi etarli emas, primerlar o'rtasida dimer hosil qilingan va hokazo) -Qayta loyihalash primerlari (primer dimer va ikkilamchi tuzilish shakllanishiga yo'l qo'ymaslik)

A-3 mg²⁺diqqat

■ Mg²⁺ konsentratsiyasi juda past - Mg ni muntazam oshirib boring²⁺konsentratsiyasi: Mg ni optimallashtirish²⁺ optimal Mg ni aniqlash uchun 0,5 mM oralig'ida 1 mM dan 3 mM gacha bo'lgan ketma -ket reaktsiyalar orqali konsentratsiyani²⁺ har bir shablon va astar uchun konsentratsiya.

A-4 Tozalash harorati

■ Yuqori tavlanish harorati astar va shablonni bog'lashga ta'sir qiladi. —- Yonish haroratini pasaytiring va 2 ° C gradiyentli holatni optimallashtiring.

A-5 uzaytirish muddati

■ Qisqa muddat - - uzaytirish vaqtini ko'paytirish.

Savol: noto'g'ri ijobiy

Fenomenlar: Salbiy namunalar maqsadli ketma -ketlik tasmalarini ham ko'rsatadi.

A-1 PCRning ifloslanishi

■ Maqsadli ketma -ketlik yoki kuchaytiruvchi mahsulotlarning o'zaro ifloslanishi - salbiy namunadagi maqsadli ketma -ketlikdagi namunani naychalash yoki ularni santrifüj trubasidan to'kib yubormaslik. Reaktivlar yoki uskunalar mavjud nuklein kislotalarni yo'q qilish uchun avtoklavda bo'lishi kerak va ifloslanishning mavjudligini salbiy nazorat tajribalari orqali aniqlash kerak.

■ Reaktivlar bilan ifloslanish - reaktivlarni ko'paytirish va past haroratda saqlash.

A-2 boshr

■ Mg²⁺ konsentratsiyasi juda past - Mg ni muntazam oshirib boring²⁺ konsentratsiyasi: Mg ni optimallashtirish²⁺ optimal Mg ni aniqlash uchun 0,5 mM oralig'ida 1 mM dan 3 mM gacha bo'lgan ketma -ket reaktsiyalar orqali konsentratsiyani²⁺ har bir shablon va astar uchun konsentratsiya.

■ Noto'g'ri astar dizayni va maqsadli ketma-ketlik nodavlat ketma-ketlik bilan gomologiyaga ega. —- Qayta dizayndagi astarlar.

Savol: Noma'lum kuchaytirish

Fenomenlar: PCR amplifikatsiya diapazonlari kutilgan hajmga mos kelmaydi, ham katta, ham kichik, yoki ba'zida o'ziga xos kuchaytiruvchi diapazonlar ham, o'ziga xos bo'lmagan kuchaytirish tasmalari ham paydo bo'ladi.

A-1 astar

■ Primerning o'ziga xosligi past

—- Qayta dizayndagi astar.

■ Primer kontsentratsiyasi juda yuqori - denaturatsiya haroratini to'g'ri oshiring va denaturatsiya vaqtini uzaytiring.

A-2 mg²⁺ diqqat

■ Mg²⁺ konsentratsiya juda yuqori - Mg2+ konsentratsiyasini to'g'ri kamaytiring: Mg ni optimallashtiring²⁺ optimal Mg ni aniqlash uchun 0,5 mM oralig'ida 1 mM dan 3 mM gacha bo'lgan ketma -ket reaktsiyalar orqali konsentratsiyani²⁺ har bir shablon va astar uchun konsentratsiya.

A-3 termostabil polimeraza

■ Ortiqcha ferment miqdori - 0,5 U oralig'ida ferment miqdorini mos ravishda kamaytiring.

A-4 Tozalash harorati

■ Qovurish harorati juda past--Tavlanish haroratini mos ravishda oshiring yoki ikki bosqichli tavlanish usulini qo'llang.

A-5 PCR tsikllari

■ PCR tsikllari juda ko'p - PCR tsikllari sonini kamaytiring.

Savol: Yopishqoq yoki smear bantlar

A-1 astar—— Yomon o'ziga xoslik--Astarni qayta loyihalash, o'ziga xosligini oshirish uchun uning o'rnini va uzunligini o'zgartirish; yoki joylashtirilgan PCRni bajaring.

A-2 DNK shablonni

—– Shablon toza emas - Shablonni tozalang yoki DNKni tozalash to'plamlari bilan chiqarib oling.

A-3 mg²⁺ diqqat

——Mg²⁺ konsentratsiyasi juda yuqori - Mgni to'g'ri kamaytiring²⁺ konsentratsiyasi: Mg ni optimallashtirish²⁺ optimal Mg ni aniqlash uchun 0,5 mM oralig'ida 1 mM dan 3 mM gacha bo'lgan ketma -ket reaktsiyalar orqali konsentratsiyani²⁺ har bir shablon va astar uchun konsentratsiya.

A-4 dNTP

DNTP konsentratsiyasi juda yuqori - DNTP konsentratsiyasini mos ravishda kamaytiring

A-5 Tozalash harorati

—- Juda past tavlanish harorati —- Tavlanish haroratini mos ravishda oshiring

A-6 davrlari

—— Juda ko'p tsikl - - Tsikl sonini optimallashtiring

Savol: 50 ml PCR reaktsiya tizimiga qancha shablon DNK qo'shilishi kerak?

Savol: Uzoq bo'laklarni qanday kuchaytirish kerak?

Birinchi qadam - tegishli polimeraza tanlash. Muntazam Taq polimeraza 3'-5 'ekzonukleaza faolligi yo'qligi sababli tekshira olmaydi va mos kelmaslik parchalarning kengayish samaradorligini ancha pasaytiradi. Shuning uchun muntazam Taq polimeraza 5 kb dan katta maqsadli bo'laklarni samarali ravishda kuchaytira olmaydi. Maxsus modifikatsiyali yoki boshqa yuqori aniqlikdagi polimerazali tak polimeraza kengayish samaradorligini oshirish va uzun bo'laklarni kuchaytirish ehtiyojlarini qondirish uchun tanlanishi kerak. Bundan tashqari, uzun bo'laklarni kuchaytirish uchun primer konstruktsiyasini, denaturatsiya vaqtini, uzaytirish vaqtini, bufer pH ni va boshqalarni moslashtirish talab qilinadi. Shabloni shikastlanishining oldini olish uchun, 94 ° C haroratda denaturatsiya vaqti har bir tsiklda 30 sekundgacha yoki undan kamgacha kamaytirilishi kerak, va kuchaytirishdan oldin haroratni 94 ° C ga ko'tarish vaqti 1 minutdan kam bo'lishi kerak. Bundan tashqari, cho'zish haroratini taxminan 68 ° C darajasida o'rnatish va 1 kb/min tezlik bo'yicha uzaytirish vaqtini loyihalash uzun bo'laklarning samarali kuchayishini ta'minlaydi.

Savol: PCR amplifikatsiyasining ishonchliligini qanday yaxshilash mumkin?

PCR amplifikatsiyasining xato tezligini turli xil DNK polimerazalari yordamida yuqori aniqlik bilan kamaytirish mumkin. Hozirgacha topilgan Taq DNK polimerazalari orasida Pfu fermenti xato darajasi past va ishonchliligi yuqori (biriktirilgan jadvalga qarang). Tadqiqotchilar fermentlarni tanlashdan tashqari, reaksiya sharoitlarini optimallashtirish, shu jumladan bufer tarkibini, termostabil polimeraza kontsentratsiyasini va PCR tsiklini optimallashtirish orqali PCR mutatsiyasini tezligini kamaytirishi mumkin.

Xabaringizni bu erga yozing va bizga yuboring