2 × Taq PCM MasterMix va boshqalar

Yuqori rentabellikga va yuqori stress qarshiligiga ega tezkor PCR premiksi.

2 × Taq PCR MasterMix-bu DNK shabloni va primerlardan tashqari PCR reaktsiyasining barcha muhim qismlari bilan yangi optimallashtirilgan va foydalanishga tayyor 2 × PCR premiksi.

Mushuk Yo'q	Paket hajmi
4993001	1 ml
4993002	5x1ml
4992912	20x5x1 ml
4992913	5 × 1 ml
4992920	20 × 5 × 1 ml
4992921	20 × 5 × 1 ml

Bizga elektron pochta xabarini yuboring

Mahsulot detallari

Eksperimental misol

Tss

Mahsulot teglari

Xususiyatlari

■ Amplifikatsiyaning yuqori samaradorligi: har xil o'lchamdagi (5 kb dan past) DNK bo'laklari va manbalarini samarali kuchaytirish mumkin.
■ Yuqori sezuvchanlik: 10 pg gacha bo'lgan maqsadli qismlar genomik shablonlardan kuchaytirilishi mumkin.
■ Yuqori stress qarshiligi: nopoklik darajasi yuqori bo'lgan shablonlar uchun, masalan, qo'pol ekstraktsiya qilingan shablon/bakteriya madaniyati, maqsadli bo'lakni osongina kuchaytirish mumkin. Qayta muzlatish va eritish polimeraza faolligiga ta'sir qilmaydi.
■ Ilovalar uchun qulay: Reaksiya tizimi oson va tez tayyorlandi. Kuchaytirilgan fragmentda TA ni klonlash uchun qulay bo'lgan 3-sonli dA-ustki qismi mavjud.

Xususiyat

Turi: Taq DNK polimeraza
Namuna: Tozalangan/qo'pol ravishda chiqarilgan shablon/bakterial madaniyat
Andoza: > 10 sahifa
Parcha hajmi: <5 kb
Ilovalar: DNK bo'laklarini PCR bilan kuchaytirish, DNKni etiketlash, primerni uzaytirish, ketma-ketlikni aniqlash, genlarni keng miqyosda aniqlash, yarim miqdorli PCR tajribalari, izli DNKni aniqlash va boshqalar.

Barcha mahsulotlar ODM/OEM uchun moslashtirilishi mumkin. Tafsilotlar uchun,Iltimos, moslashtirilgan xizmatni (ODM/OEM) bosing

Oldingi: 2 × GC ga boy PCR aralashmasi

Keyingi: Oltin oson PCR tizimi (bo'yoq bilan)

Shakl 1. Reagentlarning stressga chidamliligini aniqlash uchun TIANGEN Taq MasterMix II va Ta'minlovchidan umumiy Taq Mix yordamida turli manbalardan olingan andozalar kuchaytirildi. Natijalar shuni ko'rsatadiki, TIANGEN mahsulotlari xom genomik andozalar va bakteriyalar madaniyatidan maqsadli bo'laklarni ko'paytirishi mumkin va stressga chidamlilik etkazib beruvchi TRga qaraganda yaxshiroq. Javob: TIANGEN TIANcombi DNK Lyse va Det PCR to'plami tomonidan ishlab chiqarilgan xom genomik shablon. Prp/DN: xom qon olish va odamdan qon namunalarini aniqlash. Guruch: xom ashyoni olish va guruch namunalarini aniqlash. B: Koloniya PCR. PCR parchasi 700 ot kuchiga teng.
M: TIANGEN Marker III

Turli manbalardan va har xil uzunlikdagi andozalar uchun yaxshi universallik
Shakl 2. Har xil manbalar va uzunlikdagi bo'laklar TIANGEN yordamida kuchaytirildi Taq MasterMix II (A) va oddiy Taq TK (B) etkazib beruvchisi, TR (C) etkazib beruvchisi, V (D) etkazib beruvchisi va G (E) etkazib beruvchisi aralashmasi. Natijalar shuni ko'rsatadiki, TIANGEN mahsulotlarining keng qamrovli ishlashi amplifikatsiya qobiliyati, o'ziga xosligi va universalligi jihatidan eng yaxshisidir.M: TIANGEN Marker III1: Soya genomli DNK shabloni (120 bp);

2-3: Guruch genomli DNK shabloni (694 bp, 2258 bp);

4: Paxta genomli DNK shabloni (200 bp);

5: Escherichia coli genomik DNK shabloni (2298 bp);

6-7: Sichqoncha genomining DNK shabloni (1 kb, 2 kb);

8-10: kalamush genom DNK shabloni (1 kb, 2 kb, 2080 bp);

11-18: Inson genomining DNK shabloni (300 bp, 448 bp (GC%: 74,8%), 1100 bp, 750 bp,

1000 bp, 1090 bosim (GC%: 70,4%), 2 kb, 4 kb)

Yuqori sezuvchanlik
Shakl 3. TIANGEN yordamida kalamush va inson DNK fragmentlarining turli konsentratsiyalari kuchaytirildi Taq MasterMix II (A), oddiy Taq V (B) va TK (C) etkazib beruvchilari aralashmasi, kuchaytiruvchi sezuvchanlikni aniqlash uchun. Natijalar shuni ko'rsatadiki, TIANGEN mahsuloti genom shablonidan maqsadli fragmentni 0,01 ng gacha kuchaytirishi mumkin va uning sezuvchanligi V va TK.M etkazib beruvchilari mahsulotlariga qaraganda yaxshiroq: TIANGEN Marker III, N: NTCTemplate kirish 1-8. : 200 ng, 100 ng, 50 ng, 20 ng, 10 ng, 1 ng, 0,1 ng, 0,01 ng.

Savol: Kuchaytiruvchi bantlar yo'q

A-1 shablon

■ Andoza tarkibida oqsil aralashmalari yoki Taq ingibitorlari va boshqalar mavjud. - DNK shablonini tozalang, oqsil aralashmalarini olib tashlang yoki tozalash to'plamlari yordamida DNK shablonini oling.

■ Shablonning denaturatsiyasi to'liq emas - Denaturatsiya haroratini mos ravishda oshiring va denaturatsiya vaqtini uzaytiring.

■ Andoza degradatsiyasi-shablonni qayta tayyorlang.

A-2 astar

■ Astarlarning sifati past--astarni qayta sintez qiling.

■ Primer degradatsiyasi - Konserva qilish uchun yuqori konsentratsiyali primerlarni kichik hajmga bo'ling. Ko'p muzlatish va eritishdan saqlaning yoki uzoq vaqt davomida 4 ° C haroratda saqlang.

■ Astarlarning noto'g'ri dizayni (masalan, astar uzunligi etarli emas, primerlar o'rtasida dimer hosil qilingan va hokazo) -Qayta loyihalash primerlari (primer dimer va ikkilamchi tuzilish shakllanishiga yo'l qo'ymaslik)

A-3 mg²⁺diqqat

■ Mg²⁺ konsentratsiyasi juda past - Mg ni muntazam oshirib boring²⁺konsentratsiyasi: Mg ni optimallashtirish²⁺ optimal Mg ni aniqlash uchun 0,5 mM oralig'ida 1 mM dan 3 mM gacha bo'lgan ketma -ket reaktsiyalar orqali konsentratsiyani²⁺ har bir shablon va astar uchun konsentratsiya.

A-4 Tozalash harorati

■ Yuqori tavlanish harorati astar va shablonni bog'lashga ta'sir qiladi. —- Yonish haroratini pasaytiring va 2 ° C gradiyentli holatni optimallashtiring.

A-5 uzaytirish muddati

■ Qisqa muddat - - uzaytirish vaqtini ko'paytirish.

Savol: noto'g'ri ijobiy

Fenomenlar: Salbiy namunalar maqsadli ketma -ketlik tasmalarini ham ko'rsatadi.

A-1 PCRning ifloslanishi

■ Maqsadli ketma -ketlik yoki kuchaytiruvchi mahsulotlarning o'zaro ifloslanishi - salbiy namunadagi maqsadli ketma -ketlikdagi namunani naychalash yoki ularni santrifüj trubasidan to'kib yubormaslik. Reaktivlar yoki uskunalar mavjud nuklein kislotalarni yo'q qilish uchun avtoklavda bo'lishi kerak va ifloslanishning mavjudligini salbiy nazorat tajribalari orqali aniqlash kerak.

■ Reaktivlar bilan ifloslanish - reaktivlarni ko'paytirish va past haroratda saqlash.

A-2 boshr

■ Mg²⁺ konsentratsiyasi juda past - Mg ni muntazam oshirib boring²⁺ konsentratsiyasi: Mg ni optimallashtirish²⁺ optimal Mg ni aniqlash uchun 0,5 mM oralig'ida 1 mM dan 3 mM gacha bo'lgan ketma -ket reaktsiyalar orqali konsentratsiyani²⁺ har bir shablon va astar uchun konsentratsiya.

■ Noto'g'ri astar dizayni va maqsadli ketma-ketlik nodavlat ketma-ketlik bilan gomologiyaga ega. —- Qayta dizayndagi astarlar.

Savol: Noma'lum kuchaytirish

Fenomenlar: PCR amplifikatsiya diapazonlari kutilgan hajmga mos kelmaydi, ham katta, ham kichik, yoki ba'zida o'ziga xos kuchaytiruvchi diapazonlar ham, o'ziga xos bo'lmagan kuchaytirish tasmalari ham paydo bo'ladi.

A-1 astar

■ Primerning o'ziga xosligi past

—- Qayta dizayndagi astar.

■ Primer kontsentratsiyasi juda yuqori - denaturatsiya haroratini to'g'ri oshiring va denaturatsiya vaqtini uzaytiring.

A-2 mg²⁺ diqqat

■ Mg²⁺ konsentratsiya juda yuqori - Mg2+ konsentratsiyasini to'g'ri kamaytiring: Mg ni optimallashtiring²⁺ optimal Mg ni aniqlash uchun 0,5 mM oralig'ida 1 mM dan 3 mM gacha bo'lgan ketma -ket reaktsiyalar orqali konsentratsiyani²⁺ har bir shablon va astar uchun konsentratsiya.

A-3 termostabil polimeraza

■ Ortiqcha ferment miqdori - 0,5 U oralig'ida ferment miqdorini mos ravishda kamaytiring.

A-4 Tozalash harorati

■ Qovurish harorati juda past--Tavlanish haroratini mos ravishda oshiring yoki ikki bosqichli tavlanish usulini qo'llang.

A-5 PCR tsikllari

■ PCR tsikllari juda ko'p - PCR tsikllari sonini kamaytiring.

Savol: Yopishqoq yoki smear bantlar

A-1 astar—— Yomon o'ziga xoslik--Astarni qayta loyihalash, o'ziga xosligini oshirish uchun uning o'rnini va uzunligini o'zgartirish; yoki joylashtirilgan PCRni bajaring.

A-2 DNK shablonni

—– Shablon toza emas - Shablonni tozalang yoki DNKni tozalash to'plamlari bilan chiqarib oling.

A-3 mg²⁺ diqqat

——Mg²⁺ konsentratsiyasi juda yuqori - Mgni to'g'ri kamaytiring²⁺ konsentratsiyasi: Mg ni optimallashtirish²⁺ optimal Mg ni aniqlash uchun 0,5 mM oralig'ida 1 mM dan 3 mM gacha bo'lgan ketma -ket reaktsiyalar orqali konsentratsiyani²⁺ har bir shablon va astar uchun konsentratsiya.

A-4 dNTP

DNTP konsentratsiyasi juda yuqori - DNTP konsentratsiyasini mos ravishda kamaytiring

A-5 Tozalash harorati

—- Juda past tavlanish harorati —- Tavlanish haroratini mos ravishda oshiring

A-6 davrlari

—— Juda ko'p tsikl - - Tsikl sonini optimallashtiring

Savol: 50 ml PCR reaktsiya tizimiga qancha shablon DNK qo'shilishi kerak?

Savol: Uzoq bo'laklarni qanday kuchaytirish kerak?

Birinchi qadam - tegishli polimeraza tanlash. Muntazam Taq polimeraza 3'-5 'ekzonukleaza faolligi yo'qligi sababli tekshira olmaydi va mos kelmaslik parchalarning kengayish samaradorligini ancha pasaytiradi. Shuning uchun muntazam Taq polimeraza 5 kb dan katta maqsadli bo'laklarni samarali ravishda kuchaytira olmaydi. Maxsus modifikatsiyali yoki boshqa yuqori aniqlikdagi polimerazali tak polimeraza kengayish samaradorligini oshirish va uzun bo'laklarni kuchaytirish ehtiyojlarini qondirish uchun tanlanishi kerak. Bundan tashqari, uzun bo'laklarni kuchaytirish uchun primer konstruktsiyasini, denaturatsiya vaqtini, uzaytirish vaqtini, bufer pH ni va boshqalarni moslashtirish talab qilinadi. Shabloni shikastlanishining oldini olish uchun, 94 ° C haroratda denaturatsiya vaqti har bir tsiklda 30 sekundgacha yoki undan kamgacha kamaytirilishi kerak, va kuchaytirishdan oldin haroratni 94 ° C ga ko'tarish vaqti 1 minutdan kam bo'lishi kerak. Bundan tashqari, cho'zish haroratini taxminan 68 ° C darajasida o'rnatish va 1 kb/min tezlik bo'yicha uzaytirish vaqtini loyihalash uzun bo'laklarning samarali kuchayishini ta'minlaydi.

Savol: PCR amplifikatsiyasining ishonchliligini qanday yaxshilash mumkin?

PCR amplifikatsiyasining xato tezligini turli xil DNK polimerazalari yordamida yuqori aniqlik bilan kamaytirish mumkin. Hozirgacha topilgan Taq DNK polimerazalari orasida Pfu fermenti xato darajasi past va ishonchliligi yuqori (biriktirilgan jadvalga qarang). Tadqiqotchilar fermentlarni tanlashdan tashqari, reaksiya sharoitlarini optimallashtirish, shu jumladan bufer tarkibini, termostabil polimeraza kontsentratsiyasini va PCR tsiklini optimallashtirish orqali PCR mutatsiyasini tezligini kamaytirishi mumkin.

Xabaringizni bu erga yozing va bizga yuboring